重組腺相關(guān)病毒 (AAV)  是目前體內(nèi)基因治療常用的遞送平臺(tái)。AAV 的衣殼由三種重疊的病毒蛋白（VP1、VP2、VP3）組裝而成，其典型的化學(xué)計(jì)量比約為 1:1:10。這三種蛋白的比例分布直接決定了衣殼的轉(zhuǎn)運(yùn)能力和最終的轉(zhuǎn)基因表達(dá)效率。因此，對(duì) VP 比例進(jìn)行高精度的定量分析，是 AAV 效價(jià)監(jiān)控和產(chǎn)品放行的核心質(zhì)控環(huán)節(jié)。

最近，中國(guó)食品藥品檢定研究院（NIFDC）的研究團(tuán)隊(duì)在國(guó)際期刊 Electrophoresis 上發(fā)表了最新研究成果。該研究巧妙地結(jié)合了樣品前處理與物理學(xué)堆積效應(yīng)，在 ProteinSimple Maurice CE-SDS 平臺(tái)上開(kāi)發(fā)出了一種高靈敏、無(wú)標(biāo)記的紫外吸收（UV）檢測(cè)方法 ，用詳實(shí)的數(shù)據(jù)證明了 Maurice 系統(tǒng)在 AAV 質(zhì)控中的性能。

01.  行業(yè)痛點(diǎn)：AAV 質(zhì)控分析中的“魚(yú)與熊掌"

在測(cè)定 AAV VP 比例時(shí)，分析人員常面臨兩難選擇：

•  激光誘導(dǎo)熒光（LIF）檢測(cè)：雖然靈敏度高，但在分離前必須對(duì)蛋白進(jìn)行共價(jià)染料標(biāo)記。這種額外操作不僅可能引入雜質(zhì)，且不同染料對(duì)特定蛋白組分可能存在標(biāo)記偏差，導(dǎo)致比例失真。

•  紫外（UV）吸收檢測(cè)：無(wú)需標(biāo)記，能提供最真實(shí)、無(wú)偏差的定量數(shù)據(jù)。但 UV 的固有靈敏度往往不足以準(zhǔn)確定量豐度極低的 VP1 和 VP2。

如何兼得“無(wú)標(biāo)記的真實(shí)性"與“超高的靈敏度"？本研究團(tuán)隊(duì)在 Maurice 平臺(tái)上給出了一套具有巧思的解決方案。

02.  突破性策略：甲醇沉淀 + 進(jìn)樣堆積，潛力全面釋放

研究團(tuán)隊(duì)將 Maurice 平臺(tái)高度自動(dòng)化的電動(dòng)進(jìn)樣（Electrokinetic injection）功能與經(jīng)典的“樣品堆積（Sample Stacking）"物理效應(yīng)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了強(qiáng)悍的性能表現(xiàn)：

(1)  靈敏度躍升：信號(hào)放大 6 倍，攻克低豐度檢測(cè)壁壘

通過(guò)應(yīng)用上述“進(jìn)樣堆積"策略，UV 檢測(cè)的靈敏度得到了質(zhì)的飛躍。

一個(gè)可靠的質(zhì)控方法，其測(cè)定的比例絕不能因樣品濃度的波動(dòng)而改變。

•  寬線性范圍：研究表明，總 VP 濃度在 2.0 × 1012 至 3.0 × 1013 GC/mL 范圍內(nèi)呈現(xiàn)出的線性關(guān)系（R2 = 0.988）。

•  絕對(duì)一致的比例：在確定的最佳上樣濃度范圍內(nèi)（6.15 × 1012 至 1.85 × 1013 GC/mL），Maurice 能夠極其穩(wěn)定地輸出 VP1/VP2/VP3 的比例。即使是微量的 VP2 和 VP1，其測(cè)定百分比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）也全部保持在 7% 以下。

圖 2：跨濃度的絕對(duì)一致性。在6.15 × 1012 至 1.85 × 1013 GC/mL濃度范圍內(nèi)，Maurice 系統(tǒng)再現(xiàn)高度一致的 VP 色譜峰型。

(3)  儀器穩(wěn)定性：多日精密度驗(yàn)證

•  數(shù)據(jù)亮點(diǎn)：連續(xù) 3 天的日間重復(fù)性好，VP3、VP2、VP1 比例的 RSD% 分別低至驚人的 0.2%、4.2% 和 1.4%。這充分證明了 Maurice 系統(tǒng)在全自動(dòng)運(yùn)行下的穩(wěn)定性和抗干擾能力。

圖 3：多日精密度與重現(xiàn)性。在 1.23 × 1013 GC/mL 典型濃度下，Maurice 系統(tǒng)連續(xù) 3 天運(yùn)行的 AAV9 樣品代表性電泳圖（B-D）及空白對(duì)照（A）。譜圖高度一致，展現(xiàn)了全自動(dòng)運(yùn)行下優(yōu)異的抗干擾能力。

(4)  平臺(tái)通用性：不僅是 AAV9，更是全能選手

除了在 AAV9 上表現(xiàn)優(yōu)異外，研究團(tuán)隊(duì)還將該分析流程平移到了其他血清型中 。

•  數(shù)據(jù)亮點(diǎn)：成功測(cè)定了 AAV2（VP3:VP2:VP1 = 12.4:1.0:1.3）和 AAV8（7.1:1.4:1.0）樣品的蛋白比例。更值得一提的是，Maurice 的高分辨率甚至清晰地分離出了 AAV2 和 AAV8 樣品中的“前置 VP3 截短峰（VP3 clip）"。

04.  為何選擇Maurice CE-SDS 進(jìn)行 AAV 質(zhì)控？

NIFDC 的這項(xiàng)前沿研究證明 ProteinSimple Maurice CE-SDS 系統(tǒng)以其不可替代的核心價(jià)值，正成為基因治療領(lǐng)域的得力助手：

(1)  回歸真實(shí)，告別標(biāo)記偏差：

依托儀器優(yōu)異的 220 nm UV 檢測(cè)基線與靈活的進(jìn)樣控制，無(wú)需繁瑣的熒光標(biāo)記，即可實(shí)現(xiàn)低豐度蛋白的真實(shí)絕對(duì)定量。

(2)  全自動(dòng)化的“一鍵式"操作：

一切步驟（毛細(xì)管預(yù)處理、填膠、電動(dòng)進(jìn)樣、分離檢測(cè)）均由 Compass 軟件全自動(dòng)預(yù)設(shè)執(zhí)行。人為操作誤差降至低點(diǎn)。

(3)  多血清型廣譜兼容：

無(wú)論是 AAV2、AAV8 還是 AAV9，Maurice 都能提供一站式的清晰分離方案。

* 全文實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與技術(shù)細(xì)節(jié)參考原文：

Li Y, Sun Y, Li X, et al. Determination of AAV Capsid Protein Ratios by Sodium Dodecyl Sulfate Capillary Electrophoresis (CE‐SDS)—UV Absorption Method[J]. Electrophoresis, 2026.

* 本文轉(zhuǎn)載自「ProteinSimple」微信公眾號(hào)